若欲进行单一碱基的改变,最常用的方法是将欲改变的碱基合成在一引物序列中,利用此一引物进行PCR,所得到的PCR产物即为含有突变的DNA。也可利用PCR的方法插入额外的碱基,通常在所设计的两条引物中的其中一条加入额外的序列,以含有欲突变的基因的载体为模板,当两条引物以部分重叠背对背的方式黏在模板上,合成的PCR产物即含有所要插入的额外序列。另一个方法是将人工合成的siRNA基因克隆到一载体上,然后将所得的重组质粒放进细胞内转录出短发夹RNA(shRNA),这些shRNA会被改造成siRNA,进而形成RISC ......