（五）循环测序（cycle sequencing）

循环测序是PCR介导的测序方法，它采用耐热的DNA聚合酶，以一种温度循环的模式在模板上进行多轮的双脱氧核苷酸测序反应。在测序反应过程中，一方面模板DNA得到扩增，另一方面，ddNTP的掺入形成以特定ddNTP结尾的长短不同的DNA片段，通过电泳分离，便可获得待测DNA分子的碱基序列。首先，PCR扩增的DNA双链变性成单链状态。其次，放射性核素或非放射性核素标记的引物与其中的一条链上的互补序列退火。最后，退火后的引物在耐热DNA聚合酶的催化下发生链延伸终止反应。由此产生的模板链与延伸终止链形成的部分双链的产 ......