6﹒4﹒2目的基因整合拷贝数变异的评价

以同一品系，但不同株或不同代的转基因生物为目标样品，含有相应目的基因的阳性质粒为阳性对照样品。提取制备样品总DNA，采用IPCR（Inverse PCR）技术，针对目的基因插入区域两侧序列上的酶切位点，采用限制酶进行酶切，然后用T4DNA连接酶进行连接，使含有目的基因的酶切片段形成环状DNA。采用根据目的基因序列设计的反向引物进行PCR扩增，扩增产物为线性DNA片段，其中含有部分目的基因序列与插入区域两侧序列。检出目的基因整合拷贝数增加,这类变异可能损害目的基因的转录或表达功能，导致目的基因发生沉默，可判 ......