二、PCR引物的设计

进行PCR时需有模板DNA、两个引物、。因为引物与模板的附着主要是利用互补序列的配对，因此要设计PCR引物必须有欲扩增部分DNA序列，由此序列中选择引物的序列。若多出的序列是某个限制性内切酶的辨认序列，此PCR产物就可被此限制性内切酶作用，而能与用同一个限制性内切酶切割的载体黏合，因此比较容易克隆。所以设计RT‐PCR引物时，两个引物最好黏附在两个不同的外显子。下列是一个典型的PCR反应条件：50ng的染色体模板DNA、两个引物各20pmol／L、1.5mmol／L的镁离子、引物与模板的结合温度为50℃、 ......