[文献资料](四)注意事项

PCR引物设计: ①扩增模板引物长度为20bp左右，最好不超过200bp ，过长易形成高级结构而影响Pyrosequencing反应.测序引物3末端碱基距待测位点不超过20bp,能特异性结合PCR引物单链.一条引物5端标记生物素,用于单链HPLC分离纯化，以去除生物素单体，避免生物素单体干扰，降低单链分离效率。焦磷酸测序技术除可进行SNP位点分析外，还可结合DNA样本混合池( DNA pooling )方法对SNP频率进行分析。有研究者已完成1126样本的SNP频率分析，极大提高了SNPs单体型分析的效率 ......