乳糖发酵细菌具有乳糖渗透酶和β‐半乳糖苷酶,这两种酶对于乳糖发酵产酸都是需要的。乳糖渗透酶使乳糖分子向细菌细胞内渗入,‐半乳糖苷酶使乳糖分子的半乳糖苷键切断,产生一个分子葡萄糖和一个分子半乳糖。乳糖不发酵细菌缺少这两种酶,不能使乳糖发酵产酸。邻硝基酚‐β‐半乳糖苷(ONPG)具有与乳糖相似的分子结构,由一个分子半乳糖和一个分子邻硝基酚构成。由于β‐半乳糖苷酶的水解作用,ONPG被分解为半乳糖和邻硝基酚。ONPG为无色化合物,邻硝基酚的钠盐则呈黄色。有的细菌可在5~10分钟内出现黄色,大多数阳性反应在1小时 ......