八、PCR产物的克隆

PCR产物若需插入载体以便增殖，可利用T4DNA聚合酶将其两端变成平端（blunt ends）再进行克隆。常见的拓扑异构酶有拓扑异构酶Ⅰ及拓扑异构酶Ⅱ两种。Invitrogen公司所使用的是拓扑异构酶Ⅰ，此酶的辨认序列是CCCTT，而pCR Ⅱ‐TOPO载体上就有此一序列。PCR Ⅱ‐TOPO载体在此序列处被切开变成直线形后，在载体两端CCCTT序列的3 ’端各接一个拓扑异构酶Ⅰ，当与3 ’端有一个A的PCR产物作用时，因TA的配对，拓扑异构酶Ⅰ会将两DNA连接起来形成重组载体，整个过程只需五分钟。所以T ......