一、DNA片段与载体的连接方式

DNA片段与载体的体外连接基本上有两种方式：黏性末端连接和平头末端连接，其中黏性末端连接效率比较高，但平头末端连接为DNA片段提供了更宽泛的选择空间。为了减少和防止这种情况的发生，可提高外源DNA片段的浓度，插入片段与载体的比例一般为3 ∶ 1～5 ∶ 1或更高，从而增加DNA片段撞击载体的机会。接头（linker或adapter）是指用化学法合成的一段寡核苷酸片段，内含一个或几个限制性内切酶的识别位点，用内切酶处理后形成一端为平端、另一端为黏端的DNA小片段，将这种小片段加到平端的目的DNA片段和载体D ......