一、从革兰阴性菌中提取BLA

制备BLA粗提液常用的方法是超声波法、冻融法，也可以用Frenchpress制备。提取BLA要用对数期细胞，因为此期的细菌细胞具有较高的酶活性，培养细胞的量依据所需BLA而定。将细菌接种在肉汤培养基中，在最适条件下振摇培养18～24h后，将培养物用已预温的肉汤培养基稀释20倍继续培养4h。如果细菌产生的BLA属于Amp C酶，稀释后1.5h加入头孢西丁（100～500 μ g／ml）或亚胺培南（0.25～1 μ g／ml），有利于酶的大量产生。1 ﹒超声波法将洗涤过的细菌细胞重悬于4℃预冷的缓冲液中，在1 ......