[文献资料](四)注意事项

可运用Primer Express等软件设计探针，一般要求: ①探针5 末端不能是G ，因为单独和报告荧光基团相连的G也会淬灭荧光，而且即使是被切割下来还会存在淬灭作用。整条探针中，碱基C的含量要高于G的含量， G含量高会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针。若序列A 、 T含量较高，则设计MGB探针，连接MGB基团的探针可与互补的DNA形成高度稳定的双螺旋，大大增加配对与非配对模板间的Tm值差异，有效降低错配率。退火温度Tm为65～67℃,通常比引物Tm值高5 ～ 10 ℃ (最少要高5 ℃ ......