TD PCR是设计多循环反应的程序以使相连循环的复性温度越来越低,在适合扩增目的产物而不得到人为产物或引物二聚体的循环条件下反应。尽管复性温度最终会降到非特异杂交的Tm值,但此时目的扩增产物已开始几何扩增,在剩下的循环中处于超过任何非特异PCR产物的地位。由于目标是在较早的循环中避免低Tm值配对,在TD PCR中必须应用热启动技术。虽然TD PCR可以用简并引物,但已经发现与模板序列有很大程度错配的非简并引物也能在常规扩增缓冲液条件下从基因组DNA中的单拷贝基因得到单一目的扩增产物,甚至错配集中在引物3 ......