[辅助检查]三、哺乳动物细胞表达外源蛋白质产物的主要操作

首先，选择合适的哺乳动物细胞表达载体，通过常规基因克隆操作插入外源DNA序列，验证插入序列的方向和正确性，扩增并纯化质粒。或将病毒载体转染入包装细胞株，获得有感染能力的病毒颗粒。然后，将携带外源基因的质粒载体转染宿主细胞。或以病毒载体感染宿主细胞。阳性重组子可以选择性标记或表位标签进行筛选。应用电泳染色或免疫印迹法检测外源蛋白质的表达情况。应用不同的生物学方法分析蛋白质活性。H .单克隆鉴定：细胞大量扩增后，提取总RNA，经RT-PCR检测目的基因是否存在。 ......