[诊断]（五）PCR中的常见问题与对策

PCR实验中最常见问题是假阴性及假阳性。假阴性常见的原因有引物设计不合理、模板质量或数量不过关、 Taq DNA聚合酶活力不够或活性受抑。PCR结果的假阳性系针对被检测标本而言，即所扩增的产物是真实的，但并非来自特定待测标本。因为PCR高度灵敏，极微量靶基因污染即可导致大量扩增，因此污染是PCR假阳性的主要根源。主要存在标本间交叉污染、实验室克隆质粒污染及PCR扩增产物污染三个污染源，以第三个污染源最为重要。为避免因污染导致假阳性， PCR操作时要隔离不同操作区、分装试剂、简化操作程序及使用一次性吸头等。 ......