依据目的DNA和线性化载体末端的特点,可采用不同的连接策略。主要连接策略如下。如果目的DNA末端为平端,便可在T4 DNA连接酶的作用下,将人工接头加在目的DNA的平端上,然后用相应的限制性内切酶切割人工接头产生黏端,进而连接到用相同限制性内切酶线性化的载体上。针对目的DNA的5 ′和3 ′端,设计一对特异引物,在每条引物的5 ′端分别加上不同的限制性内切酶位点,然后以目的DNA为模板,经PCR扩增便可得到带有引物序列的目的DNA,进而用相应限制性内切酶切割PCR产物,产生黏端,随后便可与带有相同黏端的线 ......