[文献资料]五、sTNFR的制备及纯化

最初主要从人尿中提取天然的sTNFR ：将收集到的健康人尿液，经超滤浓缩后，用偶联TNF - α或抗sTNFR单克隆抗体的Sepharose 4B ，或用G蛋白、 A蛋白等进行亲和层析粗纯，用0.1M甘氨酸、 0.1M NaCl 、 pH2.6的液体洗脱有效蛋白。并进一步通过反相高效液相层析（ HPLC ）进行精纯，经过这一系列纯化步骤，可得到纯度＞ 95%的sTNFR 。从尿中纯化出的sTNFR有两种组分，相对分子质量分别为31 ～ 33kD和48kD ，前者为N -糖基化，后者含O -连接糖。体外试验证明sTNFR-IgG能完全封闭TNF - α或TNF - β的细胞毒作用，在抑制TNF活性方面比sTNFR高24倍，比TNFmAb高4倍。