四、膜结合钙的测定

镧系元素的三价离子（Ln3 ＋）在配位特性上与Ca2 ＋十分相似，可以用它取代Ca2 ＋，通过观测替代后Ln3 ＋的光谱和磁学性质来研究钙结合蛋白中Ca2 ＋的结构功能。实验证明，Tb是与突触膜上的高亲和力受体结合的，Tb3 ＋结合定位于酪氨酸或色氨酸残基，现常利用其在钙结合状态下发光的特性定量测定神经细胞特殊细胞器中的钙量，如探测膜结合钙。测定管取含40μg蛋白的突触体膜悬液,加生理盐水至2.2ml。用荧光分光光度仪(λem=545nm, ex=295nm)测定突触体膜结合Tb3+的荧光强度,间接观察突触体膜结合Ca2 ＋的变化。因Tb3+竞争性结合突触体膜上的Ca2+结合位点,所以Tb3 ＋荧光强度的增强反映了突触体膜结合Ca2 ＋水平的降低，反之升高。