三、大鼠滑膜细胞分离与培养

致炎后处死大鼠,置于0.1%苯扎溴铵溶液中浸泡5min，于膝关节正中切开皮肤，分离肌肉，露出膝盖骨，继续向下分离，可见平滑光亮的滑膜组织。用同法采集另一侧膝关节滑膜层组织，每一只大鼠可采集双侧后肢膝关节滑膜组织约15～20mg。在37℃、5%CO2的培养箱中培养消化30min，200目尼龙网过滤，300 × g离心10min，在37℃、5%CO2的培养箱中培养消化24h，弃去未黏附细胞（如淋巴细胞、红细胞等），此时的贴壁细胞为原代滑膜细胞。再加入预温的20%NBS的DMEM,使液体刚覆盖组织块为宜，继续培养，待细胞长满后用0.25%胰蛋白酶处理细胞并进行传代培养，取第3～5代细胞用于实验。