早期关于氨基酸在氢键型手性固定相N‐TFA‐1‐异亮氨酸月桂酯上拆分的基础研究表明,在分析α‐氨基酸时,对映体的流出顺序与固定相中氨基酸的构型有关,当固定相为L‐构型时,D‐氨基酸总是先于L‐氨基酸流出色谱柱。在二酰胺固定相上也是如此,如用N‐月桂酰‐D‐缬氨酸叔丁酰胺固定相分离氨基酸对映体时,L‐异构体先流出。但是,‐或γ‐氨基酸的洗脱顺序正相反,即D‐异构体总是后于L‐异构体从二酰胺固定相上被洗脱。在二肽类手性固定相上,氨基酸对映体的出峰顺序取决于二肽N‐末端氨基酸构型。