三、酶联免疫分析法

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗β‐内啡肽（β‐EP）抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗β‐EP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物T MB显色。T MB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。每孔加生物素标记抗体工作液100 μ l（取1 μ l生物素标记抗体加99 μ l生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃，60分钟。洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。