根据实验操作情况,HPLC衍生化技术分为柱前衍生化和柱后衍生化两类。这种衍生化方法是靠与带有发色基团或电化学活性基团的衍生化试剂反应使本来不能被检测的组分被检测出来,被测组分与衍生化试剂有选择地参加反应,而与样品中的其他组分分离开,或者改变被测组分在色谱柱上的出峰顺序,使之更有利于分离。柱后衍生化是将多组分样品先注入色谱柱,按选定的色谱条件使之得以分离,当各个组分从色谱柱流出后,分别与衍生化试剂相遇,在一定的反应条件下,生成带有发色功能团的衍生化产物再进入检测器。缺点是对流动相的选择更严格,必须考虑衍生化试剂、反应产物的溶解度,以及它们与流动相可能发生的副反应。检测器对衍生化试剂不能有响应。
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