免疫:取供试疫苗4个稀释度菌液,分别免疫8~10 g小鼠至少10只,每只皮下注射0.5ml,注射2次,间隔7天。同时应用同批饲养、体重与免疫组相同的小鼠3~4组,每组至少5只,作为未免疫对照用。用毒菌皮内攻击免疫豚鼠或家兔,观察对照组及免疫组动物背部皮肤反应(蓝斑直径)大小,以评价疫苗免疫力。3组用于供试疫苗,3组用于参考苗。疫苗做适宜稀释后腹腔或皮下注射小鼠。参考苗ED 50除以供试疫苗ED 50所得的比值,小川型不低于4.0,稻叶型不低于9.0,判为合格。