[解剖学&组织学]（二）RNA探针的制备和标记

用于合成c RNA探针的质粒带有来自鼠伤寒杆菌SP6噬菌体或来自大肠杆菌T7及T3噬菌体的强启动子。将靶DNA的序列插入这种强启动子下游的多克隆位点，组建重组质粒。噬菌体聚合酶对启动子有很高的特异性。用限制性内切酶在外源DNA下游使质粒线性化后，以此为模板，在SP6、T7或T3噬菌体依赖于DNA聚合酶的催化下，体外转录一条与模板DNA互补的单链RNA。因此，RNA探针的合成都起始于噬菌体启动子。终止于线状DNA分子末端的转录物只与模板双链中的一条链互补。3）该方法只适用于克隆噬菌体依赖于DNA的RNA聚合酶强启动子（如p UC质粒系列的T7位点或p GEM系列的SP6和T7位点）下游多克隆位点的目的DNA片段的体外c RNA探针的制备。