将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。但由于该技术的操作比较烦琐、费时,所以现在有一些其他的方法可以代替Southern杂交。杂交:Southern杂交一般采取的是液‐固杂交方式,即探针为液相,被杂交DNA为固相。杂交发生于一定条件的溶液(杂交液)中并需要一定的温度,可以用杂交瓶或杂交袋并使液体不断地在膜上流动。1)预杂交:NC膜浸入2 × SSC中5min,在杂交瓶中加入杂交液(8c m × 8c m的膜加5ml即可),将膜的背面贴紧杂交瓶壁,正面朝向杂交液。
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