基因的克隆涉及四个方面内容:目的基因的获得及其重组操作位点的构建— — — DNA限制性内切酶剪切。目的基因与克隆载体的体外重组。针对构建外源目的基因末端的重组位点,目前最常采用的方法是利用PCR技术在体外扩增目的基因。如果用同一种内切酶,分别剪切外源目的基因和基因载体,此时,目的基因、基因载体的两侧末端单链区之间碱基系列不仅是相互匹配的,而且目的基因自身两侧末端单链区、基因载体自身两侧末端单链区的碱基系列也是相互配对。