[文献资料]七、端粒酶抑制剂的筛选方法

1 ﹒端粒酶活性测定方法— — —改良TRAP法［ 13，57，58 ］.端粒酶的抽提:冰预冷的PBS洗涤细胞两次,悬于适量CHAPS介导的细胞裂解液［ 10mMTris‐HCl（pH7 ﹒。混合液于30℃孵育25分钟，然后85℃变性5分钟失活端粒酶，加入0.1μ gACX，0.1μ gNT，0.1amol TSNT，及3uTaqDNA聚合酶。待筛化合物如为端粒酶抑制剂，端粒酶活性将降低。将待筛化合物以无细胞毒浓度与细胞长期培养，定期检测细胞的存活状态以确定是否出现生长停滞。提取细胞DNA按Northernblot法检测端粒片段长度。