[文献资料]第6节 蛋白激酶C 的纯化和活性测定

蛋白激酶C是由多种同工酶组成的大家族，每一成员的分离纯化都有其特点，涉及的纯化方法种类繁多。本节中只介绍一些最基本的纯化方法。将前一层析柱的活性洗脱峰部位的洗脱液加载到柱上，再以0～0.8mol／L KCl线性梯度（逆向）洗脱，KCl溶于A溶液。沉淀中加入30ml CaCl2浓度为0.1mmol/L的缓冲液B,再用Polytron匀浆，同样条件离心，弃去上清液，保留沉淀。然后用逐渐降低NaCl浓度的上述缓冲液分步洗脱如下1ml内含1mol／L NaCl，1ml内含0.5mol／L NaCl，1ml内含0.25mol／L NaCl。这样纯化的PKC可达到电泳纯。