十四、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）的检测

基本原理:小鼠成纤维细胞株L929在TNF的作用下,可以出现死亡，用MTT可使活细胞染成蓝紫色，测定活细胞摄入染料的OD值，间接反映TNF的生物活性。1）富含TNF培养上清液的制备：大鼠腹腔注射3%硫代羟乙酸盐（TG）2ml／只，4d后断头处死大鼠，诱生TNF的方法同IL‐1，LPS诱生TNF的最适浓度为10 μ l／ml，亚适浓度5 μ l／ml，收集其培养上清最佳时间为6h。2）取对数生长期的L929细胞，用0.2%胰蛋白酶消化，在室温下5～10后，用RPMI‐1640洗细胞2次，并调整细胞浓度为2 × 105／ml。注意事项:L929细胞不宜过密,以2 × 105／ml为宜，加入放线菌素D可提高细胞对TNF的敏感性（10～100倍）。