[文献资料]第2节 G 蛋白的分离纯化及测定

制备溶液成分见表12‐1。分3次匀浆得到的脑组织，用双层纱网和4层纱网分别过滤两次，然后用溶液2将总体积调整至4.8L。然后移入另一离心管，加入含PMSF的溶液3，使总体积为200ml（PMSF浓度为0.1mmol／L）。最后将所有的沉淀收集在一起，加入尽量少量的溶液3，充分搅拌混匀，最后可以得到1.0～1.2L的混悬液，其蛋白浓度为20～25mg／ml。用3倍体积的溶液B稀释ACA 34柱活性峰收集液,使其胆酸盐浓度降至0.25%，然后将全部溶液加载上柱。连续用300ml溶液D及300ml溶液E形成线性梯度洗脱。按照此法，游离的β γ亚单位，Go，Gi和Gs分别先后在K3PO4浓度为40，55和100mmol／L时被洗脱。