先用胆固醇酯水解酶(CEH)将血清中的胆固醇酯(CE)水解为游离胆固醇(FC)和脂肪酸,再用胆固醇氧化酶(COD)将血清中的所有FC氧化生成Ch‐4‐烯‐3‐酮,并产生H2O2。后者与4‐氨基安替比林(4‐AAP)及苯酚在过氧化物酶(POD)作用下反应(Trinder反应)生成红色的醌亚胺,在470~550nm波长比色测定。Monarch程序中第2试剂先和标本混合反应,试剂Ⅰ应放在第2试剂的位置,试剂Ⅱ放在第1试剂的位置。应标明出厂日期及有效期,说明书应列出试剂配方及技术指标。