蛋白质的空间结构在很大程度上影响其立体选择性,因而其固定化状况极大地影响手性药物的拆分。同时由于蛋白质易变性,通常只能用温和的水相缓冲液作流动相,对柱温也有一定的要求。若p H超过蛋白质的等电点,带负电荷的蛋白质会与电离的溶质发生电荷吸引或排斥作用,导致溶质保留或选择因子改变,可见这是疏水作用和静电作用相互作用的结果。改性剂一般会减弱固定相和溶质间的疏水作用,导致溶质在CSP上保留减少,但(R)‐型和(S)‐型的减少程度往往不一样,从而改变溶质的拆分效果。但同时,柱温变化可改变离子平衡状况,如改变溶质的电离状态、导致蛋白质固定相结构改变等,最终改变溶质同CSP的手性作用力。
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