[文献资料]一、SELEX技术的基本原理

SELEX技术的基本技术路线如图1所示。DsDNA的中间部分为随机序列，两侧为固定的引物退火序列，5 ′端引物中通常包含一段T7启动子序列，以便于T7RNA聚合酶识别，并转录为随机RNA文库。靶分子在一定的缓冲条件下与单链寡核苷酸文库温育，利用硝酸纤维素滤膜法、变性凝胶电泳法或层析法分离与靶分子结合的寡核苷酸，经洗脱、纯化后，进行反转录（只对RNA文库，ssDNA文库可省去此步骤）、PCR反应，由此产生的dsDNA作为下一轮筛选使用的文库模板。在每轮筛选的同时，设立平行的结合力检测实验，随着筛选轮数的增加，Kd逐渐降低，即亲和力逐渐增强，当亲和力提高两个数量级时，将该轮的RT‐PCR产物克隆入载体，随机挑取几十个克隆，测序。