[速览]（二）质粒的大量提取

要大量提取质粒DNA，首先要在丰富培养基中扩增质粒，然后收获和裂解细菌。细菌的收获可采用低温离心的办法，细菌的裂解仍以碱裂解法最常用。封住瓶口，摇动离心瓶数次以混匀内容物，此时应不再出现分明的两个液相。未能形成致密沉淀块的原因通常是由于溶液Ⅲ与细菌裂解物混合不充分。用4层干酪包布把上清过滤至一250ml离心瓶中，加0.6体积的异丙醇，充分混匀，于室温放置10min。但下列情况下不易采用煮沸法：①未经氯霉素处理的培养物，这是由于未处理的培养物裂解后过于粘稠，不利操作。用聚乙二醇纯化质粒时，经过几次沉淀步骤，大质粒容易产生切口，所以氯化铯‐溴化乙锭梯度平衡离心法是纯化这种质粒的首选方法。