首先制备标记抗原,利用MTX的羧基和蛋白质的自由氨基的反应,将3 H‐MTX接在甲基化的牛血清清蛋白上,然后将抗原注入家兔,使家兔产生抗体。用家兔的免疫血清作为抗体,加入3 H‐MTX及MTX标准溶液(或待测液),使抗原抗体结合后离心分离,分别测定上清液及沉淀的放射量,通过标准曲线查出相应浓度。放射免疫分析法灵敏度高(可达ng级)、特异性强、测定结果准确可靠,只需50 μ l样品即能快速、直接测定体液中MTX浓度。 ......