三、单引物PCR

在某些情况下，要求扩增与已知序列相邻的未知序列，而又无法通过上述一些方法如反向PCR等方法来实现，可以考虑单引物PCR。理论上，单个引物其实无法实现产物的指数级扩增，产物无法达到可以检测的水平。事实上，单引物只是指利用已知的序列设计的一条引物，实际反应时，体系中还有另一条引物。这条引物可能是随机引物或简并引物，还有一种可能是同一条引物，两种用途，即它本身同时做特异引物，又做随机引物。反应一般进行三轮，最后一轮得到特异性条带送测序。反应时，首先用高退火温度结合特异引物，再用低退火温度结合非特异端。在三轮反应 ......