第二节 双光子显微镜简介

80年前，G ōppert第一次发现了双光子荧光激发现象。双光子荧光激发指荧光分子吸收两个低能量光子被激发的现象，其效果等同于一个高能量光子激发荧光分子，其中高能量光子的波长为低能量光子波长的一半（图41‐。总之，双光子显微镜光散射性小、穿透深度大、荧光分子仅在焦点处被激发、光毒性和光漂白效应小，使其比共聚焦显微镜更适合观察厚样品，以及活体动物内活细胞长期、动态观测。但双光子激发依赖于两个激光光子在空间和时间上的高度重合，须使用高能量钛宝石激光器，其价格昂贵，从而限制了双光子显微镜的广泛应用。 ......