第二向SDS电泳前,用含有SDS、在还原条件下的pH为6.8的Tris缓冲液中平衡。这与单进行一向SDS-PAGE电泳分离时,需将样品与含有SDS的缓冲液一起煮沸时有同样的效果。在桌上先放置干的厚滤纸,聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上。并用滤纸吸取多余的平衡液(将胶条竖在滤纸上,以免损失蛋白或损坏凝胶表面)。缩短平衡时间可以减少扩散,但同时会减少向第二向的转移,所以平衡时间要充分长(至少2 × 10min),但也不要超过(2 × 15min)。对于非常疏水的蛋白或含有二硫键的蛋白,相对于DTT和碘乙酰 ......