二、放射免疫测定法（radioimmunoassay）

放射免疫测定法始于19世纪50年代，是竞争分析法中创建最早、应用最广的一种。这种方法具有灵敏度高、特异性强、精确度和重复性好的优点，因此在生物医学研究中得到广泛重视。由于三种内源性阿片肽的特异抗体均可以制备，因此，该法可以分别测定三种不同内源性阿片肽的含量。即放射性同位素标记的抗原与非标记的抗原或样品与特异的抗体一起孵育，使抗体与抗原充分结合，形成复合物，直至达到平衡，然后除去未结合的游离抗原，测定标记的抗原抗体复合物。抗原抗体复合物和游离抗原的分离:放射性免疫测定的最后一步是孵育、结合反应已经达到稳态平衡后，将孵育液中游离抗原和抗原抗体复合物分离。