一些荧光染料在结合钙离子后吸收光谱发生改变。例如Fura‐2与离子结合后最大激发波长可从355nm增加到360nm,而最大发射波长稳定在510nm,所以可以用荧光分光光度计测量激发波长与发射波长之比,通过计算,求出[ Ca2 + ] i的浓度。激发光谱和发射光谱不漂移等优点,应用最为广泛,尤其常用于以流式细胞仪检测钙离子浓度。用荧光分光光度计,以500nm为发射波长,340nm为激发波长,连续测定荧光强度的改变,证实吸收峰340nm后,以此为波长进行测定。细胞内钙离子的浓度由以下公式求出: i=Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)。
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