八、免疫细胞内钙离子（［Ca2＋］i）浓度的测定

一些荧光染料在结合钙离子后吸收光谱发生改变。例如Fura‐2与离子结合后最大激发波长可从355nm增加到360nm，而最大发射波长稳定在510nm，所以可以用荧光分光光度计测量激发波长与发射波长之比，通过计算，求出［ Ca2 ＋ ］ i的浓度。激发光谱和发射光谱不漂移等优点，应用最为广泛，尤其常用于以流式细胞仪检测钙离子浓度。用荧光分光光度计，以500nm为发射波长，340nm为激发波长，连续测定荧光强度的改变，证实吸收峰340nm后，以此为波长进行测定。细胞内钙离子的浓度由以下公式求出: i=Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)。