[速览]三、蛋白质定量

在电泳前需要对样品的浓度进行测定，一般采用Bradford法。其他方法如BCA法、Biruet法和Lowry法定量蛋白质都是建立在将Cu ＋还原为Cu 2 ＋的颜色变化基础上的，而双向凝胶电泳裂解液中含有巯基还原剂，会影响这些定量方法的灵敏度。Bradford法是根据考马斯亮蓝G‐250和蛋白质的结合来定量蛋白质的，但这种结合也会受到裂解液中的碱性Ampholytes和尿素的影响。10mg的考马斯亮蓝G‐250溶解于5m l的95%乙醇中，与10ml 85%磷酸混合定容到100ml。标准蛋白质使用卵白蛋白或γ‐球蛋白较好，牛血清白蛋白（BSA）做标准蛋白时测得的样品浓度偏高，但在定量血清样品时比较准确。按比例稀释样品后按标准曲线的方法测定样品浓度。