第八节 大鼠肝星状细胞及库普弗细胞原代培养实验方法

大鼠肝星状细胞（HSC）及库普弗细胞（KC）分离方法是在肝离体灌流技术中，利用链霉蛋白酶裂解肝细胞、胶原酶解除肝非实质细胞间的连接、DNA酶降解DNA，形成较为完全的单细胞悬液，根据HSC和KC密度的不同，采用密度梯度离心的方法分离出HSC和KC，进行原代培养。动物及手术:一般选用300～450g体重的大鼠。预灌流一定要迅速彻底,尽可能冲净肝脏血液，否则会影响下一步酶消化效果，同时整个灌流过程应避免气泡进入门静脉引起肝内血管的空气栓塞，导致灌注不充分。为保证所分离细胞的活力,整个操作过程要严格无菌。