为什么单向免疫扩散试验结果受多种因素影响？

答：单向免疫扩散试验是抗原在含有抗体的琼脂凝胶中扩散的一种定量测定抗原含量的沉淀试验。试验通常用浓度为0.3%～1.5%的琼脂糖凝胶，其孔径大于可溶性抗原和抗体分子的颗粒，因此可溶性抗原及抗体在凝胶内扩散犹如在液体中自由运动。在单向免疫扩散试验中，将定量抗体混匀在琼脂凝胶中，继而加抗原溶液使其单独在凝胶中扩散，抗原在扩散过程中自然形成浓度梯度，在抗原抗体比例合适的部位，两者结合形成沉淀环，沉淀环的大小与加入的抗原量成正比。随着琼脂糖厚度的增加，沉淀环面积会相应缩小。其次，琼脂糖孔容积与加样体积对试验结果也有影响。体积不同但抗原绝对量相同的样品，加样体积越小，沉淀环面积相应加大，其原因可能在于抗体板上层空间未被抗原完全利用，只在下层向四周扩散，故形成的沉淀环面积稍大。因此，只有抗原液加满小孔，沉淀环面积才较符合真实数值。另外，琼脂糖凝胶板孔间距离对结果也会造成影响。为了减少沉淀环间的相互干扰，两孔间距离应比两个沉淀环最终扩散半径之和再加大5mm。