分枝杆菌
| 1 | 答：分枝杆菌属（Mycobacterium）隶属于细菌域，放线菌门，放线菌纲，放线菌亚纲，放线菌目，棒杆菌亚目，分枝杆菌科。目前属内有150个种和亚种。临床上常将分枝杆菌分为结核分枝杆菌（M.tuberc...... |
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| 2 | 答：根据非结核分枝杆菌的生长速率和色素产生情况，Runyon将非结核分枝杆菌分为四群。 Ⅰ群：光照产色菌，包括堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、猿分枝杆菌、日内瓦分枝杆菌和亚洲分枝...... |
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| 3 | 答：在理想条件下（于营养丰富的培养基上给予合适的生长温度），如果在7天内生长为肉眼可见的菌落称为快速生长分枝杆菌，如超过7天（8～60天）才能观察到菌落生长则为缓慢生长分枝杆菌。...... |
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| 4 | 答：在实际运用中发现Runyon分类系统尚存在不少缺点。根据对人类的致病性以及生物学特征的相似性，Wagne提出了分枝杆菌的复合群分类方案，此分类系统简化了鉴定程序，缩短了鉴定时...... |
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| 5 | 常见分枝杆菌菌种名称 |
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| 6 | 答：典型分枝杆菌菌体形态为微弯曲或直的杆菌，无鞭毛、无荚膜、无芽胞，不产生内、外毒素。菌体大小为（0.2～0.6）mu;m times;（1.0～10）mu;m［结核分枝杆菌大小为（0.3～0.6）mu;m times;（1.0～4...... |
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| 7 | 答：由于分枝杆菌细胞壁中含有较高的脂肪成分，不易被苯胺染料着色。虽然革兰染色法很难使分枝杆菌着色，但分枝杆菌仍归类为革兰阳性细菌。分枝杆菌革兰染色通常不着色，也可表现为...... |
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| 8 | 答：分枝杆菌为需氧、不形成芽胞、无动力的杆菌。分枝杆菌生长缓慢，繁殖一代约需2～20小时。在适宜的培养条件（随种的不同而不同，30～45℃）下，视菌种的不同，形成肉眼可见的菌落需要2天到...... |
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| 9 | 答：分枝杆菌的菌落形态随种的不同有所变化，光滑或粗糙、有色或无色，很少形成气生菌丝。菌落颜色从无色到黄色、橘黄色或粉红色，细菌产色又分为光产色菌和暗产色菌。...... |
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| 10 | 答：结核分枝杆菌不发酵糖类。与牛分枝杆菌的区别在于结核分枝杆菌可合成烟酸和还原硝酸盐，而牛分枝杆菌则否。热触酶试验对区别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌有重要的意义。结...... |
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| 11 | 答：应使用经95%乙醇擦拭（或浸泡）脱脂，干燥、清洁、无油污、无划痕的新载玻片制备涂片，在玻片一端的1/3处注明实验室序号及标本序号（如使用的载玻片一端无磨砂面，必须使用玻璃刻刀注...... |
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| 12 | 答：根据痰标本采集的时间，可将标本分为即时痰、夜间痰、晨痰三类；即时痰为就诊时深呼吸后咳出的痰液，夜间痰为送痰前一日患者晚间咳出的痰液，晨痰为患者晨起立即用清水漱口后咳出...... |
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| 13 | 答：按性状痰标本可分为以下四种：①干酪样痰：标本外观以黄色（或奶酪色）、脓样、团块状的肺部分泌物为主，黏度较黏液痰低，制片时较易涂抹；涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上...... |
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| 14 | 答：深吸气2～3次，每次用力咳出；从肺部深处咳出；将打开盖的痰盒靠近嘴边收集痰液；拧紧盒盖。注意：如果患者刚吃过东西，应先用清水漱口。装有义齿的患者在留取痰标本之前应先将义齿取出...... |
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| 15 | 答：为防止产生气溶胶或使标本外溢，小心打开盛痰标本的容器。仔细观察标本，使用折断的竹签茬端（或接种环），挑取痰标本中可疑部分约0.05～0.1ml，于载玻片正面右侧2/3处，均匀涂抹成10mm ...... |
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| 16 | 答：将染色后的涂片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明该涂片涂抹过厚。涂片过薄将影响检出率。 |
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| 17 | 答：①漂浮集菌法：痰标本经121℃高压灭菌15分钟，待冷后，取5～10ml盛于体积为100ml的玻璃容器中（口径约2cm），加灭菌蒸馏水20～30ml，总体积勿超过容器的1/3，加二甲苯0.3ml，置振荡器振荡10分钟...... |
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| 18 | 答：先用组织研磨器将组织磨碎后再进行涂片染色镜检。 |
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| 19 | 答：留全部胸水、腹水，静置弃上清液，取10～30ml置50ml离心管，经3000g离心20分钟后，取沉淀物涂片染色镜检。 |
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| 20 | 答：无菌收集脑脊液标本，置于室温或4℃ 24小时后形成薄膜，取薄膜进行涂片，或将脑脊液经3000g离心20分钟后，取沉淀物涂片染色镜检。 |
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| 21 | 答：留取24小时尿，同胸水、腹水涂片方法。 |
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| 22 | 答：将采好样的咽拭子放入无菌管，加入适量生理盐水，经振荡后取出咽拭子，液体经3000g离心20分钟后，取沉淀物涂片染色镜检。 |
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| 23 | 答：萋尔-尼尔逊染色法（Ziehl-Neelson），简称萋-尼染色法（Z-N）。染色步骤：涂片自然干燥后，火焰固定涂片，将涂片放置在染色架上，玻片间距保持10mm以上的距离；滴加石炭酸复红染液，盖满玻片，火...... |
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| 24 | 答：萋-尼染色镜检结果分级报告标准： 抗酸杆菌阴性（minus;）：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌。 报告抗酸杆菌菌数：1～8条抗酸杆菌/300视野。 抗酸杆菌阳性（1+）：3～9条抗酸杆菌/100视...... |
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| 25 | 答：萋-尼染色涂片阅读完毕后，应及时用擦镜纸轻轻在涂片上揭取数次，彻底去除涂片上的镜油。经脱油、干燥后的涂片，按实验室序号及涂片编号放置在玻片盒中，存放在阴凉干燥的环境中...... |
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| 26 | 答：常见影响萋-尼染色质量的因素见表：常见影响染色质量的因素 |
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| 27 | 答：染色步骤：玻片经火焰固定后，滴加染色液盖满玻片，染色30分钟；流水自玻片一端轻缓冲洗，洗去染色液，沥去玻片上剩余的水；痰膜上端外缘滴加脱色剂，盖满玻片，脱色3分钟或至无色，流水自玻...... |
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| 28 | 答：物镜20 times;检查结果分级报告标准： 荧光染色抗酸杆菌阴性（minus;）：0条/50视野。 荧光染色抗酸杆菌阳性（报告抗酸菌数）：1～9 条/50视野。 荧光染色抗酸杆菌阳性（1+）：10～49条/50视野...... |
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| 29 | 答：荧光染色的涂片阅读完毕后，按实验室序号及涂片编号放置在玻片盒中，玻片盒中放置干燥剂后密封放置在4℃冰箱避光保存。 |
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| 30 | 一张载玻片上只能涂抹一份痰标本。 选择脓样、干酪样、黏液分泌物涂抹制备涂片。 每张载玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于抗酸杆菌涂片检查。 涂抹后的痰膜不能太厚或者...... |
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| 31 | 答：视标本性状，加1～2倍体积消化液［N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-4% NaOH或4% NaOH或4% H2SO4］于痰瓶中，拧紧螺旋盖，在涡旋振荡器上振荡1分钟，使痰液充分匀化，室温放置。自加入消化液起，整个...... |
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| 32 | ：加入1～2ml生理盐水用组织研磨器将组织充分磨碎成混悬液，经两层消毒纱布过滤后，加1倍体积（4% NaOH）消化液，在涡旋振荡器上振荡使滤液和消化液充分混匀，室温放置15～20分钟后接种。...... |
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| 33 | 答：留全部胸水、腹水，静置弃上清液，取10～30ml置于50ml离心管，经3000g离心20分钟，取沉淀物加等量4% NaOH消化液，处理15～20分钟后接种。 |
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| 34 | 答：无菌收集脑脊液标本，置于室温或4℃ 24小时后形成薄膜，取薄膜进行涂片，或将脑脊液经3000g离心20分钟，取沉淀物接种。 |
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| 35 | 答：将采集好标本的咽拭子放入无菌管，加入适量生理盐水，经振荡后取出咽拭子，液体经离心后，取沉淀物加等量4% NaOH消化液，处理15～20分钟后接种。...... |
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| 36 | 答：留全部胸水、腹水，静置弃上清液，取10～30ml置于50ml离心管，经3000g离心20分钟，取沉淀物加等量4% NaOH消化液，处理15～20分钟后接种。 |
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| 37 | 答：同痰标本。 同痰标本处理：视标本性状，加1～2倍体积消化液［N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-4% NaOH或4% NaOH或4% H2SO4］于痰瓶中，拧紧螺旋盖，在涡旋振荡器上振荡1分钟，使痰液充分匀化，室温放...... |
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| 38 | 答：取3～5g标本，加10～20ml缓冲液或生理盐水振荡充分混匀，用两层纱布过滤，将滤液置于50ml离心管内，经3000g离心15分钟，取沉淀物加等量4% NaOH消化液，处理15～20分钟后接种。...... |
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| 39 | 答：用吸管取去污染后的标本0.1ml，均匀接种在整个培养基斜面，每份标本接种2只罗氏培养基。接种后斜面向上于37℃环境中平放24小时后，检查培养基污染情况，拧紧瓶盖，直立放置，37℃继续...... |
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| 40 | 答：分离分枝杆菌的培养基有非选择性培养基和选择性培养基。选择性培养基包含一种或多种抗生素。初分离分枝杆菌最好用液体培养基。 |
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| 41 | 答：这种培养基的优点是保存时间较长（在冰箱内可保存几个月），大多数分枝杆菌在其上生长良好，可中和对分枝杆菌有毒性的成分。该培养基的缺点是易被污染，最初生长的菌落很难进行辨别...... |
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| 42 | 答：该培养基是透明的，如结合显微镜观察可发现早期生长的菌落（10～12天），可用于抗生素的敏感性试验。该培养基的缺点是价格昂贵，保存期短（冰箱保存1个月），在配制、储存和使用时要避免过...... |
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| 43 | 答：在L-J、7H10或7H11培养基中加入不同的抗生素即可制成不同的选择性培养基。常用的有L-Gruft培养基与含环己亚胺、林可霉素和萘啶酸的L-J培养基，7H11S培养基和含有羧苄西林、...... |
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| 44 | 答：液体培养基主要用于菌株的传代、抗生素敏感性试验以及体外试验的接种物制备等。常用的有Middlebrook 7H9和Dubos土温清蛋白肉汤等。建议使用以肉汤为基础的系统作为分枝杆...... |
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| 45 | 答：大多数的临床标本，最适培养温度为35～37℃。由瘰疬分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、龟分枝杆菌和嗜血分枝杆菌引起的感染（通常来自于皮肤和软组织标本），最适培养温度为25～33℃。在较低温...... |
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| 46 | 答：用传统的培养方法分离分枝杆菌时，5%～10%的CO2浓度有助于分枝杆菌的生长，尤其在培养的最初7～10天内。由于分枝杆菌是需氧性细菌，因此不能使用烛缸法（即用点燃蜡烛以耗尽氧气的方...... |
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| 47 | 答：要确认分枝杆菌培养为阴性，培养时间一般要持续6～8周。如果涂片阳性而培养阴性时，培养时间要再延长4周。来自皮损处的标本如怀疑为龟分枝杆菌感染，培养时间要延长到8～12周。培养...... |
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| 48 | 答：标本接种后3～5天内，应检查固体培养基的生长情况，以便早期检测快速生长的分枝杆菌和便于及时检出被污染的培养物。在培养的前4周期间，每周应观察两次，以后可每周观察一次。用放...... |
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| 49 | 答：结核分枝杆菌最适生长温度为37℃。在固体培养基上，一般2～4周肉眼可见菌落。菌落粗糙、干燥、凸起、颗粒状，边缘不规则，似花菜状，多为浅黄色或黄色，不透明。在液体培养基中，细菌生...... |
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| 50 | 答：接种后第3、7天各观察一次菌落生长情况。发现菌落生长者，经抗酸染色证实后，可报告快速生长分枝杆菌阳性。此后每周观察一次，记录菌落生长及污染情况。阳性生长物经抗酸染色证...... |
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| 51 | 答：分枝杆菌培养阴性：斜面无菌落生长 分枝杆菌培养阳性（1+）：菌落生长占斜面面积的1/4。 分枝杆菌培养阳性（2+）：菌落生长占斜面面积的1/2。 分枝杆菌培养阳性（3+）：菌落生长占斜面面积的3...... |
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| 52 | 答：1） 涂阳培阴率（即涂片阳性标本中培养阴性的百分率）公式：涂阳培阴率=涂阳培阴率过高的可能原因：①标本保存不当，置于室温时间过长，没有及时进行冷藏；②标本选择不当；③标本处理时间...... |
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| 53 | 答：分枝杆菌快速培养检测系统是通过分枝杆菌快速培养仪测定细菌生长代谢，来检测分枝杆菌生长情况的方法。由于应用营养丰富的液体培养基，并且检测仪能连续监测，故提高了从标本中...... |
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| 54 | 答：快速培养检测系统的优点：缩短培养时间，阳性病例平均阳性天数9～14天；提高阳性检出率；可进行药敏试验；操作简便。快速培养检测系统的缺点：液体培养基无法观察菌落形态；仪器和试剂价...... |
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| 55 | 答：麻风分枝杆菌不能在体外进行人工培养，尚未发现麻风分枝杆菌的自然宿主，九纹犰狳是易感动物。麻风病的诊断需通过临床症状和实验室证据的支持。实验室通常采取患者的受损组织...... |
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| 56 | 答：按照传统的方法，可直接观察分枝杆菌的菌落形态、生长速度和色素的产生等特征，这种最初的分类，对未知分枝杆菌的鉴定，可提供推测性的鉴定信息，有助于选择关键的生化试验。...... |
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| 57 | 一、生长速度的概念是什么？答：生长速度是指细菌在生长过程中形成成熟菌落所需要的时间。二、成熟菌落的概念是什么？答：成熟菌落是指细菌在固体培养基上形成的肉眼可见的且不再增...... |
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| 58 | 答：分枝杆菌对光的反应性与其色素的产生有关系。某些分枝杆菌种内的光活性及色素的特性会有变化，对色素模式的解释需慎重。斯氏分枝杆菌在37℃培养时为暗产色菌，而在25℃培养时...... |
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| 59 | 答：有些分枝杆菌在避光时可产生类胡萝卜素，有些分枝杆菌则需光活化才能产生色素。根据产生色素的特性不同，可分为光产色分枝杆菌、暗产色分枝杆菌和非光产色分枝杆菌三类。...... |
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| 60 | 答：色素产生试验应该在培养的初期进行。将待检菌的稀释液接种到三支含固体培养基（L-J）的试管中，其中两支试管用锡箔或黑纸严密包裹，另一支则暴露在光线下（100W钨丝灯或荧光灯置培...... |
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| 61 | 答：在没有光线下生长时不产生色素，当在有光条件下继续培养时产生色素，这一类分枝杆菌称为光产色菌群分枝杆菌。 |
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| 62 | 答：在有光或无光处生长时产生深黄或橘黄色的菌落，继续在有光处培养，有些菌株会增加色素的产生，此类分枝杆菌称为暗产色菌群分枝杆菌。 |
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| 63 | 答：无论在有光或无光处培养均不产生色素，菌落只呈现轻微的黄色或浅黄色，即使继续在有光处培养，菌落的颜色也不会加深。这一类分枝杆菌称为非光产色菌群分枝杆菌。结核分枝杆菌复...... |
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| 64 | 答：最好选用透明的培养基（如Middlebrook 7H10 或7H11琼脂），这样在显微镜下可清晰的观察菌落的形态。根据Runyon建立的方法，使用立体显微镜的10倍镜头，采用透射光，在翻转的平板上对...... |
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| 65 | 答：检测分枝杆菌的常规生化试验有：芳基硫酸酯酶（arylsulfatase）、触酶、尼克酸蓄积试验、硝酸盐还原、吡嗪酰胺酶、5% NaCl耐受试验、硫霉素-2-羧酸酰肼（T2H）抑制试验、铁摄取试验...... |
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| 66 | 答：依据对分离分枝杆菌的生长特性进行初步鉴定，选择一些关键性试验有助于分枝杆菌的鉴定。下表是一些常见的分枝杆菌的生化特征。分枝杆菌的主要生化特性注：V，可变的；+，阳性反应；p...... |
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| 67 | 分枝杆菌与相关菌属的鉴别 |
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| 68 | 答：除了用传统生化试验外，还可用以下方法对分析杆菌进行鉴定。NAP抑制试验、GLC和HPLC色谱分析法、DNA探针技术、16S rRNA分析技术（DNA测序）、基因芯片、噬菌体生物扩增法、核酸...... |
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| 69 | 答：与临床有重要关系的分枝杆菌包括结核分枝杆菌复合群中的人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌、非洲型结核分枝杆菌，麻风分枝杆菌，以及非结合分枝杆菌中的鸟分枝杆菌、胞内分...... |
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| 70 | 答：自1992年以后，陆续从人体分离出了一些新的非结核分枝杆菌，包括德氏分枝杆菌（M.branderi）、出众分枝杆菌（M.conspicuum）、中庸分枝杆菌（M.inteshy;rjectum）、慢生黄分枝杆菌（M.lent...... |
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| 71 | 答：由结核分枝杆菌引起的感染称结核病。结核病又称为痨病和“白色瘟疫”，自有人类以来就有结核病，是一种古老的传染病。在历史上，结核病曾在全世界广泛流行，成为危害人...... |
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| 72 | 答：肺部感染常见的非结核分枝杆菌有鸟-胞内分枝杆菌复合群、堪萨斯分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和蟾分枝杆菌，不常见的有猿分枝杆菌、斯氏分枝杆菌、马尔摩分枝杆菌、偶发分枝杆菌...... |
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| 73 | 答：麻风病是由麻风分枝杆菌（M.leprae）引起的一种慢性、消耗性的肉芽肿性疾病，表现为皮肤感觉障碍和外周神经增厚、破坏。麻风分枝杆菌在1874年由Hansen从麻风患者的小结节中分离...... |
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| 74 | 答：结核分枝杆菌对链霉素、异烟肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺、利福平、氟喹诺酮类和氨基苷类等药物敏感。大多数非结核分枝杆菌对抗结核药物敏感性较差，一般对氟喹诺酮类、氨基苷类...... |
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| 75 | 答：结核分枝杆菌通过实验室检测被证实在一或多种抗结核药物存在情况下在体外依然生长即可确诊为耐药结核病（DR-TB）。耐药分为以下四种类型：单耐药：对一种抗结核药物耐药。多耐药：...... |
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| 76 | 答：分枝杆菌药敏试验方法有绝对浓度法和比例法两种方法。 |
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| 77 | 答：将配好1mg/ml菌悬液静置片刻，使其中的颗粒或菌块沉淀，取0.5ml上述1mg/ml菌悬液加至4.5ml灭菌蒸馏水试管中，振荡混匀即配成10minus;1mg/ml的菌悬液。按上述方法进行稀释直至1...... |
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| 78 | 答：比例法是世界卫生组织（WHO）全球结核病耐药监测项目统一推荐的方法。目前常用接种方法有接种环法和移液管法。一、接种环法接种环应是铂金环，铂金环的内径为3mm，每环可以移液0....... |
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| 79 | 答：接种好的培养基斜放，使菌液尽可能多地覆盖培养基表面，于37℃环境中孵育24小时后，直立培养基置于37℃环境继续培养4周观察结果，结果报告方式如下。按下列方式报告对照及含药培...... |
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| 80 | 答：用接种环接种好的培养基，直立培养基置于37℃环境培养4周观察结果。用移液管接种好的培养基斜放，使菌液尽可能多地覆盖培养基表面，于37℃环境中孵育24小时后，直立培养基置于37...... |
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| 81 | 答：每批试验应以结核分枝杆菌参考菌株（H37Rv敏感株）10minus;3mg检测含药培养基质量。接种10minus;3mg要求对照培养基菌落数在200个以上且无融合，若菌落数低于50个时，要求重新作...... |
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| 82 | 答：①选择新鲜、生长旺盛的菌落进行药敏试验，生长不良或陈旧菌株应传代后再进行试验；②比浊、菌液稀释应力求精确，以保证接种菌量的准确；③分枝杆菌药敏试验应在生物安全柜中进行...... |
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| 83 | 答：结核分枝杆菌药敏试验的折点判断标准参考CLSI M24-A2 Table 3，非结核分枝杆菌药敏试验的折点判断标准参考CLSI M24-A2 Table 4-6。 |
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