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耐药基因的检测

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ESBLs主要有哪些类型?

答:ESBLs主要包括:SHV,TEM,CTX-M(及Toho),OXA,PER,VEB,BES等类型。

ESBLs主要有哪些类型?
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如何检测某一类ESBLs?

答:每一类ESBLs,可设计一个通用引物进行PCR检测,实际检测时可以参照部分文献中提供的引物,常用的引物见表5-1-1。PCR体系:50μl,其中buffer 5μl,dNTP 4μl,引物各0.25μl,聚

如何检测某一类ESBLs?
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CTX-M型ESBLs可分为几组?

答:根据其氨基酸序列的同源性,可以将CTX-M 型ESBLs大致分成五组,第一组包括CTX-M-1,-3,-10到-12,-15,-22,-23,-28,-29和CTX-M-30;第二组包括CTX-M-2,-4到-7,-20和Toho-1;第三组包括CTX-M-8

CTX-M型ESBLs可分为几组?
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如何对五组CTX-M型ESBLs进行筛选?

答:根据五组CTX-M型ESBLs的氨基酸同源性,可以设计相应的通用引物进行检测。具体的引物及反应条件见表:PCR所用引物及其扩增片段和退火温度

如何对五组CTX-M型ESBLs进行筛选?
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如何确定某一菌株所产ESBL的基因型?

答:对于表型研究中怀疑或者确认有ESBL的细菌,可以先用每一类ESBLs的通用引物进行PCR扩增,然后选取相应的测序引物(下表)进行PCR扩增及测序,将测序所得序列进行比对后确认其基因型

如何确定某一菌株所产ESBL的基因型?
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AmpC酶有哪些种类?

答:AmpC酶分为染色体介导AmpC酶和质粒介导AmpC酶。根据染色体AmpC酶的表达模式可分为诱导型AmpC酶和结构型(持续高产)AmpC酶。

AmpC酶有哪些种类?
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质粒AmpC酶的临床意义是什么?

答:相对于染色体AmpC酶来说,质粒AmpC酶具有可传递性和持续高水平表达,增加了耐药性传递的可能性,也增加了临床用药的难度。

质粒AmpC酶的临床意义是什么?
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质粒AmpC酶主要存在于哪些细菌?

答:天然缺乏AmpC结构基因的细菌,如:克雷伯菌属、奇异变形杆菌和沙门菌属;缺乏AmpR、由弱启动子和衰减机制调控而低水平表达的大肠埃希菌。

质粒AmpC酶主要存在于哪些细菌?
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质粒AmpC酶可分为几类?

答:目前质粒AmpC酶已经有40多种,根据氨基酸的同源性及进化树分析,将其分为六群:来源于枸橼酸杆菌的CIT群;来源于阴沟肠杆菌的EBC群;来源于摩根摩根菌的DHA群;来源于蜂房哈夫尼亚菌

质粒AmpC酶可分为几类?
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分子生物学检测方法检测质粒AmpC酶的意义?

答:表型检测不能区分染色体AmpC酶和质粒AmpC酶,只能通过分子生物学方法才能确认质粒AmpC酶的存在。

分子生物学检测方法检测质粒AmpC酶的意义?
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质粒AmpC酶的分子生物学检测方法有哪些?

答:质粒AmpC酶可以通过多重PCR进行初步检测,以确定质粒AmpC酶所属群,然后可以通过型特异引物PCR及测序确定其准确的型别。

质粒AmpC酶的分子生物学检测方法有哪些?
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多重PCR的原理是什么?

答:根据质粒ampC基因的分群,设计具有群特异性的6对引物,放在同一PCR反应体系中进行扩增,在检测质粒AmpC酶的同时根据电泳条带的位置初步分群。

多重PCR的原理是什么?
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多重PCR检测质粒AmpC酶的步骤是什么?

答:①热裂解提取DNA:取过夜纯培养细菌单一菌落,接种至5ml LB肉汤,37℃过夜培养,取1.5ml菌液转至Eppendorf管,13 200rpm离心5分钟,去上清,在沉淀中加入500µl双蒸水,95℃加热10分

多重PCR检测质粒AmpC酶的步骤是什么?
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对各型别质粒AmpC酶基因检测中应该注意哪些

答:质粒AmpC酶目前有40多个型别,对每个型别的PCR检测中,应该注意引物的特异性。自己设计引物需要一定的经验,所以最好是借用已得到公认的文献中的引物。退火温度:不同PCR仪的性能

对各型别质粒AmpC酶基因检测中应该注意哪些问题?
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KPC碳青霉烯酶目前有哪些基因型?

答:目前KPC型碳青霉烯酶的型别已有14种,分别为KPC-2~KPC-15。我国主要是KPC-2型碳青霉烯酶。少数菌株产生KPC-3型碳青霉烯酶。

KPC碳青霉烯酶目前有哪些基因型?
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如何准确检测KPC碳青霉烯酶基因?

可采用PCR的方法检测KPC型碳青霉烯酶基因。PCR检测KPC及部分常见碳青霉烯酶所用引物见表:PCR检测部分碳青霉烯酶的引物

如何准确检测KPC碳青霉烯酶基因?
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PCR检测mecA基因的意义?

答:mecA基因是甲氧西林耐药葡萄球菌(MRS)特有的耐药基因,在其耐药性中起决定性的作用。葡萄球菌检出mecA基因或PBP2a即可定为MRS。PCR通过直接检测细菌染色体上的mecA基因来确证

PCR检测mecA基因的意义?
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如何用多重PCR准确鉴定MRSA?

答:MRS包括MRSA和MRSCN,多重PCR采用同时检测mecA基因和femA基因,或者mecA基因和凝固酶基因(coa gene),能准确区分MRSA 和MRSCN。所用引物见表5-1-6,反应条件见相关文献。

如何用多重PCR准确鉴定MRSA?
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MRSA的分子生物学检测方法还有哪些?

答:除了使用PCR外,还可以使用核酸杂交技术和生物传感器等技术检测MRSA,此两类方法结果比较准确,但成本较高。

MRSA的分子生物学检测方法还有哪些?
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耐万古霉素肠球菌(VRE)的耐药基因有哪几种?

答:VRE耐药基因分为VanA、VanB、VanC、VanD、VanE、VanG、VanL、VanM及VanN等型。VanA型可被万古霉素和替考拉宁诱导且对二者高度耐药,VanB型只能由万古霉素诱导对万古霉素耐

 耐万古霉素肠球菌(VRE)的耐药基因有哪几种?
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多重PCR检测质粒VRE的步骤?

答:①细菌总DNA抽提:将细菌接种在LB液体培养基中,35℃摇床过夜。取1.5ml菌液倒入Eppendorf管中,12 000r/min离心5分钟,弃上清液,用100μl裂解液(内含25μg溶菌酶)将细菌重悬,混匀

多重PCR检测质粒VRE的步骤?
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