多重PCR检测质粒AmpC酶的步骤是什么?

答:①热裂解提取DNA:取过夜纯培养细菌单一菌落,接种至5ml LB肉汤,37℃过夜培养,取1.5ml菌液转至Eppendorf管,13 200rpm离心5分钟,去上清,在沉淀中加入500µl双蒸水,95℃加热10分钟,13 200rpm离心5分钟,取2µl上清作为模板。②PCR反应体系:共50µl,其中buffer 5µl,Mg2+ 3µl,dNTP1µl,MOX F/R 0.6/0.6µl,CIT F/R 0.6/0.6µl,DHA F/R 0.6µl,ACC F/R 0.5/0.5µl,EBC F/R 0.5/0.5μl,FOX F/R 0.4/0.4µl,聚合酶0.25µl,双蒸水32.35µl,模板2µl。所用6对引物见表5-1-4。③PCR反应程序:94℃ 3分钟,94℃ 30秒,64℃ 30秒,72℃ 1分钟,72℃ 7分钟,4℃保温。④PCR产物电泳:2%琼脂糖胶,80V,电泳1小时。在成像仪上拍照,根据所出现条带的位置初步分群。

多重PCR检测质粒AmpC酶的引物序列及扩增片段长度

多重PCR检测质粒AmpC酶的引物序列及扩增片段长度

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