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共28

病原微生物的分子诊断

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什么是核酸?核酸包括哪些类型?

答:核酸(nucleic acids)是生命的最基本的物质之一,存在于所有真核生物、原核生物、病毒或噬菌体内,其承担着生物体遗传信息的携带和传递,是物种进化和繁衍的物质基础。天然存在的

什么是核酸?核酸包括哪些类型?
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核酸提取的主要步骤是什么?

答:核酸提取的主要步骤包括:①细胞破壁与核酸的释放;②核酸的分离与纯化;③核酸的浓缩、沉淀和洗涤三个主要的步骤。

核酸提取的主要步骤是什么?
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核酸提取过程中,细胞破壁的方法有哪些?

答:细胞的破碎方法很多,主要分为物理法和化学法两大类。物理法主要有超声波处理法、微波处理法反复冻融法、液氮研磨法等,缺点是存在机械剪切力,损害核酸分子结构的完整性。化学

核酸提取过程中,细胞破壁的方法有哪些?
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在核酸的分离与纯化过程中,需要除去的杂质成

答:在核酸的分离与纯化过程中,需要除去的杂质成分主要包括以下三大类:①非核酸的大分子物质,如蛋白质、多糖、脂类等;②非需要的核酸分子,提取DNA时的RNA分子,提取RNA时的DNA分子;③

在核酸的分离与纯化过程中,需要除去的杂质成分主要包括哪些类型?
5

在核酸提取的操作过程中,该如何保持核酸结构

答:在核酸提取的操作过程中,为保持核酸结构的完整性,应尽量简化操作步骤,减少各种破坏核酸的有害因素:①控制一定的pH范围(pH 4~10),避免过酸或过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏和影响

在核酸提取的操作过程中,该如何保持核酸结构的完整性?
6

对于常见的临床标本,核酸分离提取的原则是什

答:临床常见的标本有血液、尿液、唾液、分泌物、组织及细胞等。不同的实验目的,对于核酸的浓度、纯度、完整性等要求各不相同。目前核分离与纯化的方法很多,材料多样且各具特点

对于常见的临床标本,核酸分离提取的原则是什么?
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对于细菌或真菌的纯培养物,基因组DNA的粗提

答:基因组DNA的粗提法仅适合于对基因组DNA完整性要求不高的分子生物学实验,如靶基因部分序列的分子检测与鉴定、耐药基因及耐药相关突变的检测等。粗提法提取细菌或真菌的基因

对于细菌或真菌的纯培养物,基因组DNA的粗提的方法主要有哪些?
8

请试述SDS-CTAB法提取细菌基因组DNA的步骤

答:SDS-CTAB法的操作步骤如下:①细菌收集:100ml细菌过夜培养液,5000rpm离心10分钟,去上清液。②菌体裂解:加9.5ml TE悬浮沉淀,并加0.5ml 10% SDS,50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶K,混

请试述SDS-CTAB法提取细菌基因组DNA的步骤。
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核酸的分离、纯化、贮存等有无相应的CLSI文

答:CLSI MM13-A《分子实验标本的收集、运输、核酸制备和贮存;批准指南》提供分子实验标本有关正确安全的标本采集、核酸的分离、核酸纯化的内容,以及涉及每个检测标本/核酸类型

核酸的分离、纯化、贮存等有无相应的CLSI文件?
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分子生物学诊断在感染性疾病的应用主要有哪

答:分子生物学诊断(molecular diagnostics)也叫做核酸检测(nucleic acid-based tests,NATs),其在感染性疾病的应用主要包括:①用于感染性疾病的早期诊断,弥补血清学抗体检测存在的&ld

分子生物学诊断在感染性疾病的应用主要有哪些?
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感染性疾病的分子生物学检测技术主要有哪些

一、直接检测特定细菌性病原体的技术:①循环扩增技术:普通PCR(conventional polymerase chain reaction)、巢式PCR(nested PCR)、半巢式PCR(seminested PCR)、反转录PCR(reverse tran

感染性疾病的分子生物学检测技术主要有哪些?
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根据核酸检测的技术原理,直接核酸检测技术可

答:按核酸检测的技术原理,直接核酸检测(direct NATs)主要包括两大类,一类靶向扩增的直接核酸扩增检测(target-amplified direct nucleic acid amplification tests,NAATs),其采用人工

根据核酸检测的技术原理,直接核酸检测技术可分为哪两大类型?
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直接核酸检测相对于其他微生物检测方法的优

答:①检测时间短:一些需要长时间培养的细菌(如结核杆菌)或病毒,直接核酸检测的方法能在1~6小时内得到检验结果。②检测通量高:一些直接核酸检测可以在同一个时间里进行几百个标本的

直接核酸检测相对于其他微生物检测方法的优势主要有哪些?
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直接检测病原微生物对于公共卫生的安全防范

答:由于直接核酸检测具有检测时间短、检测通量高、检测的灵敏度高等特点,在重大疫情爆发或者生物恐怖主义的袭击时,直接核酸检测能快速及时地作出正确的诊断或分析,如应对措施得

直接检测病原微生物对于公共卫生的安全防范有何重大意义?
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直接核酸检测的潜在局限性主要有哪些?

答:①假阴性:某些第一代直接核酸扩增检测(NAATs)会因为扩增抑制作用而导致试剂灵敏度的降低(如采用尿标本检测衣原体),从而引起假阴性结果,但这种抑制作用可通过内在监控或扩增控制

直接核酸检测的潜在局限性主要有哪些?
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直接核酸检测方法检测的与感染性疾病相关的

目前,可采用商品化的、非商品化的直接核酸检测方法检测的与感染性疾病相关的病原微生物主要有哪些?答:目前,可采用商品化的、非商品化的直接核酸检测方法检测的与感染性疾病相关

直接核酸检测方法检测的与感染性疾病相关的病原微生物主要有哪些?
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与感染性疾病分子诊断相关的CLSI文件主要有

答:与感染性疾病分子诊断相关的CLSI文件主要有MM3-A《感染性疾病的分子诊断方法;批准指南》、MM6-A《感染性疾病的分子定量检测技术;批准指南》、MM9-A《医学实验室的核酸测序

与感染性疾病分子诊断相关的CLSI文件主要有哪些?
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分子生物学诊断中的假阳性原因有哪些?

答:分子生物学诊断中出现假阳性的原因有:①扩增前处理中的污染;②试剂、水、培养基中出现外源性靶DNA;③引物特异性差;④不合适的扩增条件;⑤实验员自身污染。

分子生物学诊断中的假阳性原因有哪些?
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分子生物学诊断中的假阴性原因有哪些?其最常

答:出现假阴性的原因有:①扩增实验受到抑制;②在核酸的提取、处理和保存过程中的不慎造成模板核酸的丢失;③内源性DNA酶及RNA酶对模板核酸的降解;引物设计较差(如引物不在保守区域

分子生物学诊断中的假阴性原因有哪些?其最常见的假阴性原因是什么?
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关于病原细菌、真菌的DNA测序鉴定,有无相应

答:CLSI MM18-A《DNA靶基因序列分析鉴定细菌和真菌的解释标准;批准指南》详细菌介绍了基于广范围PCR(broad-range PCR)的基因测序和序列分析在纯培养细菌和真菌鉴定中的应用,包括

关于病原细菌、真菌的DNA测序鉴定,有无相应的CLSI指导性文件?
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广范围PCR进行病原菌的检测与普通PCR有何异

答:广范围PCR是PCR技术一个重要的改进,与针对某种特定微生物专门设计的特异PCR所不同,广范围PCR是针对某一类或某一大类的微生物设计的通用型PCR技术。例如,在使用普通PCR技术诊

广范围PCR进行病原菌的检测与普通PCR有何异同?请举例说明。
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广范围PCR进行病原菌的检测有何优点和缺点?

答:广范围PCR进行病原菌的检测的最大优点在于其广谱性,即一套引物就能扩增出一大类亲缘关系相近的微生物,能节省引物合成的所需的成本和时间,并在未知病原体的发现和鉴定中扮演

广范围PCR进行病原菌的检测有何优点和缺点?
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广范围PCR鉴定时为什么常与DNA测序的序列分

广范围PCR应用于病原细菌、真菌的检测和鉴定时,为什么常与DNA测序的序列分析相结合?答:广范围PCR能检测某一类(或某一大类)微生物特定基因的部分序列,但需要对扩增的目的片段进行

广范围PCR鉴定时为什么常与DNA测序的序列分析相结合?
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常用于细菌的广范围PCR检测的靶基因有哪些?

常用于细菌的广范围PCR检测的靶基因有哪些?为什么细菌的广范围PCR通常选用16S核糖体RNA(16S rRNA)基因作为靶基因?16S rRNA基因作为广范围PCR的靶基因有何优点和缺点?答:常用于细

常用于细菌的广范围PCR检测的靶基因有哪些?
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细菌16S rRNA基因广范围PCR扩增的引物主要

细菌16S rRNA基因广范围PCR扩增的引物主要有哪些?扩增参数如何?答:目前,16S rRNA基因的广范围引物序列已经公开(下表)。由于细菌16S rRNA基因的前500bp的变异较大,包含了丰富的种属

细菌16S rRNA基因广范围PCR扩增的引物主要有哪些?
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用于广范围PCR扩增的真菌引物主要有哪些?扩

答:目前,用于真菌广范围PCR扩增的基因主要有真菌ITS区间、28S rRNA基因D1/D2区,具体的引物见下表。真菌ITS区间的PCR扩增参数基本如下:94℃5分钟;94℃ 1分钟,57℃ 1分钟,72℃ 1分钟

用于广范围PCR扩增的真菌引物主要有哪些?扩增参数如何?
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简述基于广范围PCR的基因测序鉴定病原细菌

请简述基于广范围PCR的基因测序鉴定病原细菌、真菌的技术流程。答:目前,大多数的DNA自动荧光测序仪均采用双脱氧链终止测序法。细菌的DNA测序鉴定,首先是提取细菌的基因组DNA,以

简述基于广范围PCR的基因测序鉴定病原细菌、真菌的技术流程
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该如何对靶基因测序的序列分析结果进行解释

答:美国CLSI组织的文件MM-18A《DNA靶基因序列鉴定细菌和真菌的解释标准;批准指南》详细介绍了广谱基因测序技术(broad-range gene sequencing)在细菌与真菌鉴定中的应用,其中综合

该如何对靶基因测序的序列分析结果进行解释?
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