请试述SDS-CTAB法提取细菌基因组DNA的步骤。

答:SDS-CTAB法的操作步骤如下:①细菌收集:100ml细菌过夜培养液,5000rpm离心10分钟,去上清液。②菌体裂解:加9.5ml TE悬浮沉淀,并加0.5ml 10% SDS,50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶K,混匀,37℃保温1小时。加1.5ml 5mol/L NaCl,混匀;再加1.5ml CTAB/NaCl溶液,混匀,65℃保温20分钟。该步骤中,SDS裂解细菌的细胞壁,蛋白酶K去除蛋白成分,CTAB能去除多糖成分。③抽提:加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,室温放置5~10分钟;5000rpm离心10分钟,将上清液移至干净离心管。再使用等体积氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提,取上清液移至干净管中。④沉淀:加1倍体积的异丙醇,混匀,室温放置10分钟。5000rpm离心10分钟。⑤洗涤:沉淀用75%的乙醇洗涤。⑥溶解:晾干后,溶于ddH2O或pH 8.0 TE中。SDS-CTAB法提取的基因组DNA纯度高、完整性好,能用于随机扩增多态性DNA、随机引物PCR、扩增片段长度多态性、DNA(G + C)mol%含量、DNA-DNA杂交等多种实验的要求。

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