为什么逐渐不采用PCR-限制性片段长度多态性法检测血小板特异性抗原基因型?

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答:PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的原理是从血液或组织细胞中提取基因组DNA,设计包含等位基因多态性区域的引物进行PCR扩增,扩增后的DNA片段用特异性的核酸内切酶消化,利用琼脂糖凝胶电泳分离消化片段。根据PCR产物是否被酶切及酶切片段长度来区分各等位基因。该方法的缺点是在PCR扩增的基础上加上了酶切步骤,酶切条件不易掌握,如果酶切不充分可能得到错误信息,此外也并非每个HPA等位基因都可以直接用此方法进行分型,因此局限了该方法的应用。不过,目前通过引物修饰产生“人为的酶切位点”,使PCR产物能直接用于RFLP,已经能成功用于大部分HPA等位基因的分型。

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