近10年来系统性真菌感染病例明显增多,真菌的获得性耐药株的出现及多种抗真菌药物的可选择性,使抗真菌药物敏感试验成为指导临床医生用药的手段之一。抗真菌药物敏感试验可分为定量试验和定性试验,定量试验可报告最低抑菌浓度(MIC),定性试验可报告试验真菌对药物敏感(susceptible,S)、中介(intermediate,I)和耐药(resistant,R)。 由于真菌药物敏感试验影响因素颇多,如真菌生长的速度、药物在体内的代谢、培养条件等,所以真菌药敏试验结果与疗效的一致性至今是本领域需要探讨的重要课题。本栏目将对与抗真菌药物敏感试验的判断标准;真菌药敏试验的方法学;真菌药敏试验的临床应用等相关的问题进行提问和回答。
答:大多数菌株必须在35℃用PDA(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)上活化7天;镰刀菌必须在35℃孵育48~72小时后再在25~28℃孵育到第7天;在孵育7天的菌落上滴加含0.01ml吐温20的生理盐水1ml,制
16答:采集产孢期原始分离培养基上分离的菌落悬浮于含吐温20的生理盐水中,静置3~5分钟,使大颗粒沉于试管的底部,取上层均匀液体(内含试验所需的孢子囊孢子、分生孢子和菌丝体)至另一无
17答:微量稀释法药敏试验采用分光光度计测试菌悬液浓度,不同真菌类别要求浓度不同,曲霉菌、申克孢子丝菌OD值应调节至0.09~0.11(80%~82%透光度),镰刀菌、波氏假性阿利什霉OD值应调至0.
18答:琼脂稀释法真菌药敏试验,要求配制0.5麦氏单位浓度的菌悬液(相当于1 × 108CFU/ml),再作两倍稀释获得1 × 104CFU/ml菌悬液,每一药物稀释孔加入5μl菌悬液。
20答:抗真菌药物含量是否计算正确是真菌药物敏感试验能否正确报告的重要因素,所以必须正确配制试验药物的溶液:因为临床制剂常常为了溶解和使用的需要加入其他药物成分如复性剂等
22答:①按厂家提供的分析含量称重,如厂家说明书提示该药物的分析含量为99.5%,即1mg = 0.995mg;②按计算公式计算你需要的浓度下的溶液应称该药物的质量:质量(mg)=体积(ml需要配制溶液
23答:配制储存液首先要确立配制的浓度。选择试验需要配制的浓度系列,浓度系列中最高的含量为基准;配制高于最高含量10倍的超浓溶液,即可成为试验药物的储存液。对难溶于水和不溶于
24答:不溶于水或难溶于水的药物可用二甲亚砜(DMSO)、乙醇、聚乙二醇、羧甲基纤维素等非水溶剂进行溶解,但具体应选择哪一种应根据厂家提供的资料作决定。对用非水溶剂溶解的药物应
25答:稀释系列应包含CLSI提供的判断折点的敏感、中介和耐药的浓度范围;无判断折点的药物可根据该药物药代动力学数据获得的体内疗效评判标准如Cmax/MIC制订稀释范围;按药敏试验报
27答:培养温度要求在35℃,但培养时间按不同真菌类别是不相同的,如根霉菌需培养21~26小时可判读结果;而镰刀菌、曲霉菌和申克孢子丝菌需培养46~50小时才判读结果;波氏假性阿利什霉需孵
28答:氟康唑和伏立康唑(可用美国BD公司BBL产品),另外有ROSCO公司生产的多种抗真菌药物的纸片,包括有氟康唑、酮康唑、伊曲康唑、两性霉素B和氟胞嘧啶等。如采用ROSCO纸片应按说明书
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