限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)简称为限制性内切酶或限制酶,是一类核酸内切酶,能识别双链DNA分子内部的特异位点并裂解磷酸二酯键。除极少数限制性内切酶来自绿藻外,绝大多数来自细菌。因此,通常所说的限制酶特指Ⅱ型限制酶。例如,EcoR Ⅰ在正常情况下识别“ — GAATTC — ”序列,但在甘油浓度大于5%(v/v)或反应温度较低时识别序列可变为“ — AATT — ”或“ —嘌呤嘌呤AT嘧啶嘧啶— ”,这种现象称为星号活性(star activity),以EcoR Ⅰ ......