[辅助检查]三、PCR 反应中常见问题及解决办法

在进行PCR反应时，有时会遇到一些问题，需改变或调整各种影响PCR的参数及条件，以改善反应产物的产量和特异性。此时应检测引物浓度，并分析所用各引物有无二级结构形成。3 ﹒反应体系中是否有蛋白酶或核酸酶存在，因为二者可分别降解DNA聚合酶和DNA模板。可在加入Taq DNA聚合酶前，将反应系统在95℃保温5～10分钟，使蛋白酶和核酸酶失活。6.DNA样品中是否存在抑制物，如离子性去垢剂（如SDS和肌氨酰）、酚、肝素、二甲苯腈和溴酚蓝等。若有，重新抽提、乙醇沉淀和／或离心超滤有可能解决问题。4 ﹒减少循环周期 ......